新闻资讯
全部分类
公司新闻
行业新闻

使用磁珠法提取中草药RNA时注意事项

发布时间：

2025-08-18 00:00

 1. 样品前处理优化

 （1）材料选择与破碎

    新鲜或快速冷冻样本：中草药组织（如根、叶）采集后立即液氮冷冻，避免RNA降解。

    精细研磨：在液氮中研磨至细粉（避免过热），确保细胞充分裂解。

 （2）裂解缓冲液改良

    高盐+强变性剂：  

      使用含 4 M异硫氰酸胍 和 β巯基乙醇（12%）的裂解液，抑制RNase并解离多糖蛋白复合物。  

      针对多酚丰富的草药（如丹参、绿茶）：添加 2% PVPP（聚乙烯聚吡咯烷酮） 或 1% Triton X100 吸附多酚。  

    pH控制：调节裂解液pH至4.55.0（酸性环境减少多糖溶解）。

 2. 磁珠选择与结合条件

 （1）磁珠类型

    硅基磁珠：优先选择表面修饰硅羟基的磁珠（如SiO₂@Fe₃O₄），在高盐条件下特异性结合RNA。

    抗干扰磁珠：针对多糖/多酚污染，可选羧基磁珠（如Thermo Fisher的 ChargeSwitch技术）。

 （2）结合优化

    盐浓度：添加终浓度 35 M NaCl 或 20-30% PEG 8000，促进RNA磁珠结合。

    温度与时间：4℃结合10分钟（减少降解），避免室温长时间操作。

 3. 去除干扰物关键步骤

 （1）多糖去除

    低温沉淀：裂解后4℃静置10分钟，离心去除多糖沉淀（上清用于RNA提取）。

    DNase I处理：在磁珠结合前加入DNase I（避免DNA污染）。

 （2）多酚素处理

    洗涤液改良：  

      用 70%乙醇（含0.1 M NaCl） 洗涤2次，去除残留多酚。  

      严重色素干扰时：增加 5 mM维生素C 到裂解液抗氧化。

 4. RNA洗脱与质控

 （1）低RNA载量对策

    小体积洗脱：用 20-50 μL无RNase水（预热至60℃）洗脱，提高浓度。

    重复洗脱：同一份磁珠用洗脱液处理2次，合并洗脱液。

 （2）完整性检测

    电泳：琼脂糖凝胶电泳检查

    纯度标准：Nanodrop检测A260/A280≈2.0，A260/A230＞1.8（低值提示多糖/多酚残留）。

 

 注意事项总结

 速度优先：从取样到RNA稳定（如乙醇沉淀或冻存）尽量在30分钟内完成。  

 避免过度干燥：磁珠洗涤后短暂晾干（≤1分钟），过度干燥会降低RNA溶解度。  

 批次差异：不同部位（根 vs 叶）或生长期的中草药需调整裂解时间。  

推荐新闻